ערכת PCR משולבת בזמן אמת של וירוס קורונה (SARS-CoV-2).
ערכת PCR רגישה מאוד ומוכנה לשימוש זמינה בפורמט ליופיליזציה (תהליך ייבוש בהקפאה) לאחסון לטווח ארוך.הערכה ניתנת להובלה ולאחסנה בטמפרטורת החדר והיא יציבה לשנה.כל צינור של תערובת קדם מכילה את כל הריאגנטים הדרושים להגברת ה-PCR, כולל Reverse-transcriptase, Taq polymerase, פריימרים, בדיקות ומצעי dNTPs.זה רק צריך להוסיף 13ul מים מזוקקים ו-5ul תבנית RNA מופק, ואז זה יכול להיות מופעל ולהגביר על מכשירי PCR.
מכונת ה-qPCR צריכה להיפגשהדרישות הבאות:
1. התאם צינור PCR 8 רצועות נפח 0.2 מ"ל
2. יש יותר מארבעה ערוצי זיהוי:
| עָרוּץ | עירור (ננומטר) | פליטה (ננומטר) | צבעים מכוילים מראש |
| 1. | 470 | 525 | FAM, SYBR גרין I |
| 2 | 523 | 564 | VIC, HEX, TET, JOE |
| 3. | 571 | 621 | ROX, טקסס-אדום |
| 4 | 630 | 670 | CY5 |
פלטפורמות PCR:
מערכת 7500 בזמן אמת PCR, Biorad CF96, iCycler iQ™ מערכת זיהוי PCR בזמן אמת, Stratagene Mx3000P, Mx3005P
הקושי בהובלת שרשרת קרה שלמגיב חדש לגילוי חומצות גרעין של קורונה
כאשר ריאגנטים קונבנציונליים לזיהוי חומצות גרעין מועברים למרחקים ארוכים, (-20±5) ℃ אחסון והובלה בשרשרת הקרה נדרשים כדי להבטיח שהאנזים הביו-אקטיבי של הריאגנטים יישאר פעיל.כדי לוודא שהטמפרטורה מגיעה לסטנדרט, יש צורך בכמה קילוגרמים של קרח יבש עבור כל קופסה של מגיב לבדיקת חומצות גרעין אפילו פחות מ-50 גרם, אבל זה יכול להימשך רק יומיים או שלושה.בפרספקטיבה של פרקטיקה בתעשייה, המשקל האמיתי של ריאגנטים שהונפקו על ידי יצרנים הוא פחות מ-10% (או הרבה פחות מערך זה) מהמיכל.רוב המשקל מגיע מקרח יבש, מאריזות קרח וקופסאות קצף, כך שעלות ההובלה היא גבוהה ביותר.
במרץ 2020, COVID-19 החל להתפרץ בקנה מידה גדול בחו"ל, והביקוש לריאגנט חדש לגילוי חומצות גרעין של קורונה עלה באופן דרמטי.למרות העלות הגבוהה של ייצוא הריאגנטים בשרשרת הקירור, רוב היצרנים עדיין יכולים לקבל זאת בשל הכמות הגדולה והרווח הגבוה.
עם זאת, עם שיפור מדיניות הייצוא הלאומית של מוצרים אנטי מגיפה, כמו גם שדרוג השליטה הלאומית על זרימת האנשים והלוגיסטיקה, ישנה הארכה ואי ודאות בזמן ההובלה של ריאגנטים, מה שהביא לבעיות מוצר בולטות שנגרמו. על ידי התחבורה.זמן הובלה ממושך (זמן הובלה של כחצי חודש נפוץ מאוד) מביא לתקלות תכופות במוצר כאשר המוצר מגיע ללקוח.זה הטריד את רוב מפעלי היצוא של ריאגנטים לחומצות גרעין.
טכנולוגיה ליופיליזית עבור מגיב PCR סייעה בהובלה שלמגיב חדש לגילוי חומצות גרעין של קורונה ברחבי העולם
ניתן להעביר ולאחסן את ריאגנטים PCR המעופפים בטמפרטורת החדר, מה שיכול לא רק להפחית את עלות ההובלה, אלא גם למנוע את בעיות האיכות הנגרמות מתהליך ההובלה.לכן, ליאופיליזציה של המגיב היא הדרך הטובה ביותר לפתור את בעיית הובלת היצוא.
ליאופיליזציה כוללת הקפאת תמיסה למצב מוצק, ולאחר מכן סובלימציה והפרדה של אדי המים בתנאי ואקום.המומס המיובש נשאר במיכל עם אותו הרכב ופעילות.בהשוואה לריאגנטים נוזליים קונבנציונליים, ריאגנט זיהוי חומצת גרעין חדש ל-Coronavirus בעל רכיב מלא, המיוצר על ידי Liming Bio בעל המאפיינים הבאים:
יציבות חום חזקה במיוחד:זה יכול לעמוד בטיפול ב-56℃ למשך 60 ימים, והמורפולוגיה והביצועים של המגיב נשארים ללא שינוי.
אחסון ותחבורה בטמפרטורה רגילה:אין צורך בשרשרת קירור, אין צורך לאחסן בטמפרטורה נמוכה לפני ביטול האיטום, שחרר במלואו את שטח האחסון הקר.
מוכן לשימוש:ליאופיליזציה של כל הרכיבים, אין צורך בתצורת מערכת, הימנעות מאובדן רכיבים בעלי צמיגות גבוהה כגון אנזים.
מטרות מרובות בצינור אחד:יעד הגילוי מכסה את הגן החדש של נגיף הקורונה ORF1ab, גן N, גן S כדי למנוע את הגנובאריציה של הנגיף.על מנת להפחית שלילי כוזב, הגן האנושי RNase P משמש כבקרה פנימית, כדי לענות על הצורך הקליני בבקרת איכות הדגימה.
